镇静剂类药残留分析技术——提取方法
来源/作者:中国优德游戏app官网优德游戏app官网网  日期:2021-09-18

(2)提取方法

1)巴比妥类

乙腈乙酸乙酯是巴比妥类药物提取中最常用的有机溶剂。

戴晓欣等4采用乙酸乙酯提取水产品中的苯巴比妥,回收率在80.49%~ 102.42%之间,RSD为1.52%~10.15%,方法LOD为10 μg/kg, LOQ为30 μg/kg。由于鱼肉的含水量较高,用乙腈和甲醇提取时,会将大量的水和水溶性杂质提取出来,后面旋转蒸发时间长,测定时有干扰;而用乙酸乙酯作提取溶剂,旋转蒸发时间减少近一半,乙酸乙酯更适合作为水产品提取剂。赵海香等提取猪肝与猪肾中4种巴比妥药物。样品加入无水硫酸钠和乙腈,30℃下超声提取30 min,超声功率450 W,离心后取上清液进一步净化,气相色谱-质谱(GC-MS)测定,外标法定量。4种药物的LOD,猪肝中不高于0.65 μg/kg,猪肾中不高于1.00 ug/kg; LOQ在猪肝中不高于2.20 ug/kg,猪肾中不高于3.35 μg/kg;4种药物回收率为68%~90%,RSD 均低于10%。该作者7还采用加速溶剂萃取(ASE)技术提取猪肉中的巴比妥,异戊巴比妥和苯巴比妥残留。采用乙腈作提取溶剂,压力10.3 MPa持续30 min,溶剂挥发后再进一步固相萃取柱净化。 方法平均回收率为84.0%~ 103.0%,变异系数(CV)为1.6%~12%,LOD 为0.5 μg/kg,LOQ为1μg/kg。

巴比妥类药物呈酸性,酸性条件下以分子状态存在,更易进入有机溶剂,能提高提取效率。

我国检验检疫行业优德游戏app官网SNT 2217-2008用酸性乙腈提取鸡肉,猪肉,猪肝和鱼肉中的苯巴比妥戊巴比妥异戊巴比妥和司可巴比妥等6种巴比妥类药物,LC-MSMS测定,方法LOD为1 μg/kg,回收率为78.6%~110%。Wang等测定动物和水产品可食性组织中巴比妥类药物,用无水硫酸钠,酸化乙腈提取,30℃下超声波辅助提取10 min,LC-MS/MS测定,方法平均回收率79.6%~ 108%,CV小于11%, LOQ为0.5 μg/kg。王勇等先用盐酸(pH 1~2)酸化动物心,肝,脾,肺,肾,再用乙醚提取组织中的苯巴比妥。研究发现乙醚提取效率比乙腈高,但提取杂质也多。血液中的巴比妥类药物,可用酸性缓冲优德游戏app官网(pH 2)直接沉淀蛋白后进样;或用乙腈-甲醇,乙酸乙酯将巴比妥类药物提取至有机相,有机提取液经离心过滤后-般不再净化,可吹干转换到合适溶剂直接测定或衍生化后测定。如果与其他类药物同时提取,则要综合考虑各因素,采取合适提取溶剂。

2)苯二氮卓类

苯二氮卓类药物主要用乙腈,乙酸乙酯等有机溶剂提取。同时,利用苯二氮卓类药物的碱性特性,在碱性环境下采用有机溶剂提取可提高提取效率。

Gunn等测定血清和全血中12种苯二氮卓类药物(包括阿普唑仑替马西泮奥沙西泮去甲西泮氯硝西泮劳拉西泮地西泮利眠宁咪达唑仑氟硝西泮,7-氨基氯硝西泮和7-氨基氟硝西泮)时,用4℃冷乙腈沉淀蛋白,涡动提取,提取液转换溶剂后进超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)分析。该方法较为简单,但灵敏度较低。张玉洁等1[1采用乙腈提取猪肉中的地西泮残留,在30℃水浴中超声提取10 min。对常用溶剂乙腈,乙酸乙酯,乙腈-水(90+10,v/v)进行比较试验,发现乙腈提取效率最高,杂质最少;乙酸乙酯提取效率也较高,但杂质多于前者。该试验还对30℃,10min超声辅助提取(UAE)和振荡提取两种条件下的提取效率和杂质情况进行了比较,结果发现超声提取效率高,杂质溶解少,而振荡提取的提取效率低,共提取杂质却多于前者。汪丽萍等可用乙腈提取猪肉中的地西泮,艾司唑仑,阿普唑仑,三唑仑等4种苯二氮卓类药物。地西泮回收率为60%~70%,RSD为7.6%~12.9%, LOD为2 μg/kg;艾司唑仑,阿普唑仑,三唑仑等3种药物回收率为60%~115%,RSD 为3.8%~19.7%,LOD为10 μg/kg。我国内贸行业优德游戏app官网SB/T 10501-200817,用乙腈提取畜禽肉中的地西泮,匀浆肌肉组织加乙腈在超声波水浴中提取10min。方法LOD为10μg/kg,回收率为70%~9%。

黄士新等测定猪血浆和尿液中的地西泮,对二氯甲烷,正已烷,乙酸乙酯等不同溶剂的提取效率进行了比较,发现乙酸乙酯提取回收率较高且易于浓缩,作为提取溶剂效果最佳。该方法回收率为81.6%~105.4%,RSD 为3.8%~13.6%,LOD为0.5 ug/L。Jang 等用乙酸乙酯提取唾液中25种苯二氮卓类药物,提取液直接进样分析,LOD 为0.01~0.5 ng/mL,LOQ为0.1 ~0.5 ng/mL,回收率为81%~95%。孙雷等测定猪肉和肾脏中的甲喹酮,奥西泮,地西泮,硝西泮和替马西泮等10种镇静剂。研究发现在酶解后,用氢氧化钠优德游戏app官网调节体系pH 9.7±0.2,然后分别用乙酸乙酯和叔丁基甲醚进行提取,再采取低温脱脂,高速离心等办法进行净化,每种药物均获得了满意的回收率,且能很好地去除杂质干扰。10 种镇静剂的LOD为0.5 μg/kg, LOQ为1 μg/kg,回收率为64.5%~111.4%。钱晓东等用含1%氨水的乙酸乙酯提取水产品中的地西泮及其代谢物,平均回收率为82.1%~119.0%。但肌肉中的大量脂肪亦被同时提取出,需要进一步脱脂净化。于慧娟等用1%氨化乙酸乙酯提取鱼类样品中的地西泮及其代谢物去甲地西泮,替马西泮和奥沙西泮残留,平均回收率为85.7%~105.6%。

谢秀红等建立GC-MS法同时定性分析血液中的安定,硝基安定,氯硝安定,三唑仑,艾司唑仑和阿普唑仑残留。样品用乙醚萃取,50℃水浴中N2吹干,残留物用乙醇溶解后进样分析,方法LOD为5 μg/L。Lee等用甲醇提取毛发中的地西泮,劳拉西泮,去甲地西泮,奥西泮,替马西泮,咪达唑仑和唑吡坦残留,毛发剪碎后用甲醇38℃提取16 h,提取后用固相萃取净化,GC-MS测定。地西泮,劳拉西泮,去甲地西泮,奥西泮,替马西泮的LOD为5 ng,咪达唑仑和唑吡坦的LOD为10ng,LOQ均为10~20 ng,回收率为71%~103%。Fermandez 等建立了微波辅助萃取(MAE) 血浆中阿普唑仑,溴西泮,地西泮,劳拉西泮,氯甲西泮和硝西泮的方法。用8 mL氯仿-丙醇(4+1,v/v)于89℃萃取13 min,回收率为(89.8%±0.3%)~(102.1%±5.2%)。研究表明,萃取时间明显影响萃取效率。

3)吩噻嗪类

吩噻嗪类药物极性有较大差异,其中,异丙嗪极性较小,而赛拉嗪极性较大,常根据极性用氯仿,乙酸乙酯,乙腈和乙醚等提取。但乙醚易生成过氧化物,对氯丙嗪等药物的萃取率影响较大,常加入维生素C以消除过氧化物对吩噻嗪类药物的氧化作用,提高回收率。同时,本类药物均显碱性,在碱性环境下脂溶性升高,用碱性有机溶剂提取,效率提高。
Delahaut等用乙腈提取猪组织中的乙酰丙嗪,氯丙嗪,丙酰丙嗪,阿扎哌隆等药物。用乙腈振荡提取15 min,肌肉和肾脏的回收率均大于90%。洪月玲等比较了甲醇和乙腈提取猪肉及虾肉中氯丙嗪的效率,试验表明乙腈提取率高,杂质少,提取回收率为80%~101%。Tanaka等用乙腈直接提取血清中的氯丙嗪,左米丙嗪,甲哌丙嗪,奋乃静和异丙嗪等12种吩噻嗪类药物后进样测定,回收率为87.6%~99.8%,检测限为3.2~5.5ng/mL。李春风等用含1%浓氨水的乙腈优德游戏app官网提取水产品中的氯丙嗪,乙酰丙嗪,丙酰丙嗪,异丙嗪,甲苯噻嗪等5种吩噻嗪类药物效果较好。采用氨化乙腈优德游戏app官网提取,可抑制碱性吩噻嗪类化合物的离子化程度,降低极性,从而提高其在乙腈中的溶解度。氨化乙腈还用于均质提取步骤,可提高吩噻嗪类药物提取效率,平均回收率为75.7%~87.7%,RSD为9.0%~15.2%。

Cheng等报道了用乙酸乙酯提取猪组织中地西泮,氯丙嗪,异丙嗪和安眠酮的方法。对乙腈,0.1 mol/L盐酸-乙腈(5+95,v/v),乙酸乙酯,氨水-乙醚(5+95,v/v),氨水-二氯甲烷(5+95,v/v),氨水-叔丁基甲基醚(5+95,v/v)和氨水-乙酸乙酯(5+95,v/v)的提取回收率和净化程度进行比较,最后选择乙酸乙酯提取。方法LOD为0.2~0.3μg/kg,L0Q 为0.5~1μg/kg,平均回收率为87.6%~106.8%。陈国征用乙酸乙酯提取尿液中氯丙嗪,方法LOD为0.05 ug/mL,CV为3.05%~4.15%,样品加标回收率为98.1%~101%。吕燕等用乙酸乙酯和1 mol/L氢氧化钠优德游戏app官网提取猪肝中的氯丙嗪,平均回收率为80.2%~90.6%,RSD为5.9%-8.6%,LOD为1 ug/kg。郑水庆等测定血液中的氯丙嗪时,加入同位素内标地西泮-d5,在大于pH 10条件下用乙酸乙酯-苯(1+1,v/v)提取,回收率为79.9%~85.5%,LOD 为0.3 ng/mL。

Holland等用 氯仿提取肾脏中的赛拉嗪及其代谢物2,6-二甲基苯胺(2,6-dimethylaniline)。该提取液直接用于硅藻土固相萃取净化后高效液相色谱(HPLC)测定。牛肾中塞拉嗪和2,6-二甲基苯胺的平均回收率分别为78.3%和87.2%,CV分别为9.51%和9.61%;猪肾中塞拉嗪和2,6-二甲基苯胺的平均回收率分别为80.8%和86.7%,CV分别为7.33%和7.10%。

朱砾等建立了血液中氯丙嗪的测定方法。取血清0.4 mL加内标安定120 ng,再加入1 mol/L NaOH 0.2 mL,加含维生素C的乙醚4mL,旋涡振荡2min,静置1h,取上清液3.5 mL, 40℃水浴氮气流下吹干,用150 μL流动相溶解残留物,取60 μL进行HPLC分析。回收率在92.0%~99.4%之间,LOD为10 ng/mL。苏海滨等IBS用特丁基甲醚-乙腈~5mol/L氢氧化钠优德游戏app官网(12+0.2+0.2,v/v)提取牛奶中的乙酰丙嗪,氯丙嗪,赛拉嗪等8种镇定剂残留。牛奶中的回收率在86.29%~92.49%之间,RSD在8.99%~20.56%之间;奶粉中的回收率在81.59%~97.49%之间,RSD 在1.76%~16.70%之间;牛奶中的LOD为0.1~0.5 μg/kg,奶粉为0.8~4.0 μg/kg。

4)丁酰苯类

丁酰苯类药物均呈碱性,残留提取同样根据极性和酸碱性选用合适的溶剂提取。

Cerkvenik-Flajs等用乙腈提取猪肾脏中阿扎哌隆和阿扎哌醇,提取液酸化后用MCX固相萃取净化,HPLC测定。阿扎哌隆和阿扎哌醇的平均回收率分别为88.2%和91.2%,实验室内CV分别小于11.0%和9.0%;LOD分别为1.1 μg/kg和1.2 μg/kg, LOQ为5 μg/kg和10 μg/kg。Zawadzka等用乙腈提取猪肾脏和肝脏中阿扎哌隆,回收率为91.2%~107.0%,检测限(CCa)和检测能力(CCβ)分别为125.9 ug/kg和160.0 μg/kg。

Aoki等用1 mol/L NaOH碱化动物组织,使阿扎哌隆和阿扎哌隆呈分子态,再加入正已烷,将药物从碱性组织优德游戏app官网中萃取入正己烷中。两种药物的LOD均为0.025μg/g,回收率均大于72%。我国国家优德游戏app官网GB/T20763-2006(39)在 碱性条件下用特丁基甲醚提取猪肉中氟哌啶醇,阿扎哌酮和阿扎哌隆等药物,提取效率较高,回收率均大于90%。

5)多种类同时提取

多种类镇静剂类药物同时提取和测定,大大提高了检测效率。

常青等建立了体液中巴比妥,异戊巴比妥,苯巴比妥,奥沙西泮,地西泮,硝西泮,氯硝西泮,艾司唑仑,阿普唑仑和三唑仑的定性定量分析方法。血浆样品经0.1 mol/L氢氧化钠优德游戏app官网碱化后,用乙酸乙酯萃取,萃取液经氮气吹干,再用乙酸乙酯溶解后进行GC-MS分析。10 种药物的回收率均在92%~117%之间,日内,日间RSD在4.09%~ 14.26%范围内,LOD为2~20 μg/L。Bock等开发了一种运用LC-MS/MS测定猪和牛肾脏中镇静剂阿扎哌隆和它的代谢产物阿扎哌醇,氯丙嗪,丙酰丙嗪和乙酰丙嗪,氟哌啶醇和甲苯噻嗪等药物的方法。使用猪的肾脏作为污染的动物样品,测试和验证了不同种类的溶剂以及萃取和净化方式。提取率最高的方法是采用氨水和乙酸乙酯的混合液,振荡提取,不需固相萃取净化。

Mitrowska等用乙腈提取猪,牛肾脏中氯丙嗪,丙酰丙嗪,乙酰丙嗪,三氟丙嗪等吩噻嗪类药物,以及阿扎哌隆和阿扎哌醇的药物残留。提取物用C18固相萃取柱净化后,用LC-MS/MS测定。方法回收率为73.2%~110.6%,CV小于13.0%;CCa为:吩噻嗪类5.8~6.6μg/kg,阿扎哌隆105.5μg/kg,阿扎哌醇121.4μg/kg,CCβ为:吩噻嗪类6.3~7.6μg/kg,阿扎哌隆119.0μg/kg,阿扎哌醇140.0μg/kg。Zhang等用乙腈同时提取组织中的11种镇静剂(苯巴比妥,艾司唑仑,咪达唑仑,地西泮,硝西泮,癸氟奋乃静,氯丙嗪,乙酰丙嗪,氟哌啶醇,塞拉嗪,阿扎哌醇)。通过比较甲醇,乙腈和乙酸乙酯作为提取液,发现乙腈的提取效果最好,杂质少,回收率最高。猪,牛肌肉,肾脏,肝脏中药物回收率在76.49%~118.6%之间,CV为2.2%~19.9%,LOQ为0.5~2.0μg/kg。

 

 

文章来源:《兽药多组分残留分析技术》

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【关键词】乙腈 乙酸乙酯 甲醇 无水硫酸钠 苯巴比妥 戊巴比妥 异戊巴比妥 乙醚
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